抗體（antibody）指機體的免疫系統在抗原刺激下，由B淋巴細胞分化成的漿細胞所產(chǎn)生的、可與相應抗原發(fā)生特異性結合反應的免疫球蛋白。1890年人類(lèi)第一次利用血清注射治療疾病獲得成功，為現代醫學(xué)開(kāi)創(chuàng )了一條新路，后來(lái)人類(lèi)研究發(fā)現其有效成分為抗體，抗體技術(shù)的發(fā)展經(jīng)歷了以下四個(gè)階段：

第一代：雜交瘤單克隆抗體技術(shù)

第二代：嵌合抗體和人源化改造單克隆抗體技術(shù)；

第三代：全人源單克隆抗體技術(shù)；

第四代：天然全人源單克隆抗體技術(shù)；

不同抗體技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)比較

本文對四代抗體技術(shù)的發(fā)展歷程和優(yōu)缺點(diǎn)做進(jìn)一步介紹。

雜交瘤單克隆抗體

1975年，英國科學(xué)家Milstein和Kohler[1]發(fā)明了雜交瘤單克隆抗體技術(shù)，將小鼠脾臟中的B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合后得到的雜交細胞具有兩種親本細胞的特性，獲得既能夠分泌抗體又能夠無(wú)限傳代的雜交瘤細胞。

雜交瘤技術(shù)所產(chǎn)生的鼠單抗會(huì )引起人體明顯的副反應。主要表現在鼠抗體的FC不能激活人的效應系統，如抗體依賴(lài)性細胞介導的細胞毒作用（ADCC）和補體依賴(lài)的細胞毒作用（CDC）；鼠抗體作為異源蛋白進(jìn)入人體，會(huì )激發(fā)人體免疫系統產(chǎn)生人抗小鼠抗體（HAMA）；異源蛋白在人體內清除很快，抗體半衰期短等。

嵌合抗體和人源化改造單克隆抗體技術(shù)

嵌合抗體（ChimericAntibodies）是由動(dòng)物源性抗體的V區基因與人源抗體的C區基因拼接為嵌合基因，使抗體的70%成分都是人成分，然后插入載體，轉染細胞生產(chǎn)抗體[2-3]。人源化改造單克隆抗體(HumanizedAntibodies)是將動(dòng)物源性抗體的CDR或者SDR[4]移植到人源抗體的骨架上，使抗體的90%成分都是人成分，人源化抗體可降低抗體的免疫原性，延長(cháng)抗體藥物半衰期[5-6]。

無(wú)論嵌合抗體還是人源化抗體，其序列中依然存在動(dòng)物源成分，依然會(huì )引起機體的免疫排斥，導致抗抗體的產(chǎn)生及藥物療效的大大降低。

全人源抗體

全人源抗體(all-HumanAntibodies)，是指組成抗體的氨基酸序列100%是來(lái)自于人的抗體。全人源抗體相比前面兩種抗體來(lái)講，免疫原性大大降低，安全性得到了很大的提高。目前主要的全人源抗體技術(shù)包括抗體庫展示技術(shù)和轉基因動(dòng)物技術(shù)。

庫展示技術(shù)平臺，目前工業(yè)界發(fā)展較為成熟是噬菌體庫展示技術(shù)[7]，是將抗體基因序列插入到噬菌體外殼蛋白結構基因中，使抗體基因隨外殼蛋白的表達而表達（圖1）。CAT公司的全球首個(gè)全人源抗體Humira來(lái)自噬菌體展示技術(shù)，先篩選和靶抗原高效結合的抗體重鏈的可變區，再篩選和靶抗原高效結合的抗體輕鏈的可變區，將結合最好的抗體輕鏈重鏈重組表達成一個(gè)完整的抗體[8,9]。特點(diǎn)：人源成分100%，免疫原性大大降低，但其抗體輕鏈和重鏈可能存在不配對問(wèn)題，并且抗體沒(méi)有經(jīng)過(guò)人體環(huán)境免疫耐受的選擇。

轉基因動(dòng)物技術(shù)是將人類(lèi)抗體重鏈和輕鏈的基因引入抗體基因缺陷的小鼠，使之擁有人類(lèi)抗體基因，用抗原免疫該小鼠而獲得全人源抗體[10]，主要的研發(fā)企業(yè)包括Medarex、Abgenix、Regeneron、OMT、Kymab、TRIANNI,Inc.和Ablexis,LLC等。特點(diǎn)：人源成分100%，免疫原性大大降低，其缺點(diǎn)是所產(chǎn)生的抗體在小鼠體內成熟，沒(méi)有經(jīng)過(guò)人體環(huán)境免疫耐受的選擇，實(shí)際上是一種“鼠源化”人單克隆抗體，所以依然存在安全隱患。

天然全人源單克隆抗體技術(shù)

天然全人源抗體（Naturalall-Humanantibodies），是指抗體就是來(lái)自于天然的人的B細胞。天然全人源抗體主要技術(shù)包括人骨髓瘤細胞技術(shù)、B細胞永生化技術(shù)（EBV轉化B細胞克隆及其他細胞因子輔助B細胞克隆）、單個(gè)B細胞RT-PCR及單個(gè)B細胞測序等技術(shù)，這類(lèi)技術(shù)是以從人體上的B細胞為起始點(diǎn)，最后得到單個(gè)B細胞所表達的有用的抗體。近年來(lái)以人單個(gè)B細胞克隆技術(shù)平臺為代表的第四代抗體技術(shù)嶄露頭角，盡管仍然存在各種各樣的問(wèn)題，但是該技術(shù)領(lǐng)域正在發(fā)生日新月異的變化。如百健利用單個(gè)B細胞RT-PCR方法開(kāi)發(fā)的天然全人源Aducanumab[11-12]，靶向寡聚的Amyloid-β，有望成為首個(gè)可以逆轉阿爾茨海默癥進(jìn)程的藥物。

目前國內外掌握天然全人源單克隆抗體技術(shù)的公司有Aridis、iRepertoire、AIMM、Xbiotech、Humabs（VirBiotechnology子公司）、Neurimmune和Trinomab(中國,珠海)等幾家公司，其各自特點(diǎn)如表1所示：

Aridis公司的MabIgX-C技術(shù)

通過(guò)與其專(zhuān)利保護的骨髓瘤細胞進(jìn)行細胞融合，開(kāi)發(fā)周期較長(cháng)，操作較繁瑣，效率較低下

單個(gè)B淋巴細胞的多重PCR，再結合NGS技術(shù)分離天然全人源抗體，開(kāi)發(fā)成本較高

通過(guò)其專(zhuān)利保護兩種細胞因子BCL6和Bcl-xL引入記憶B細胞實(shí)現永生化，開(kāi)發(fā)周期較漫長(cháng)，操作較繁瑣，技術(shù)較為復雜

HUMABS公司（VirBiotechnology子公司）的CellClone技術(shù)

運用TLR和IL-6兩種細胞因子及EBV病毒使B細胞永生化，結合RT-PCR技術(shù)篩選抗體，開(kāi)發(fā)周期較長(cháng)

Xbiotech公司的TrueHuman?技術(shù)，Neurimmune公司的RTM?技術(shù)

利用傳統基因克隆從人的PMBC細胞中分離出抗體基因，再進(jìn)行重組，開(kāi)發(fā)周期較漫長(cháng)，操作較繁瑣

利用分選的單個(gè)漿細胞或抗原特異性B細胞RT-PCR技術(shù)，結合線(xiàn)性化克隆技術(shù)，高效快速分離天然全人源抗體

泰諾麥博（Trinomab）公司的核心天然全人源單克隆抗體技術(shù)平臺（HitMab?）。該技術(shù)平臺生產(chǎn)的單克隆抗體是真正的天然全人源單克隆抗體，其主要技術(shù)路線(xiàn)如圖2所示：收集志愿者PBMC，通過(guò)流式分選單個(gè)B細胞，進(jìn)行單個(gè)B細胞培養，構建線(xiàn)性表達系統，最后對重組抗體進(jìn)行驗證。整個(gè)實(shí)驗流程實(shí)現了“高通量”、“高效率”和“可操作”，可快速獲得有效的天然全人源單克隆抗體。

天然全人源單克隆抗體的主要特點(diǎn)：不僅基因序列100%是人的，而且其親和力和特異性是經(jīng)過(guò)人體的免疫耐受環(huán)境下選擇而成熟的，以人免疫耐受為指導進(jìn)行表位選擇，理論上對人體自身無(wú)免疫原性，抗體重鏈和輕鏈是天然原生配對組合，稱(chēng)之為天然全人源抗體。毫無(wú)疑問(wèn)，天然全人源抗體，將在臨床應用上給予患者最大的安全性保證。