用溶出來(lái)控制產(chǎn)品的質(zhì)量，請看Merck是怎么做到的！

　　固體口服制劑溶出試驗已經(jīng)使用了幾十年以幫助進(jìn)行處方/工藝開(kāi)發(fā)以及檢查并確保藥品的批間質(zhì)量一致性和有效性[1]。

　　美國藥典（USP）通則<1092>《溶出試驗方法開(kāi)發(fā)與驗證》對溶出方法的開(kāi)發(fā)過(guò)程進(jìn)行有價(jià)值的說(shuō)明。USP通則<711>《溶出度》項下規定了多種溶出試驗方法。

　　有很多文獻報道了關(guān)于溶出方法開(kāi)發(fā)的研究成果，如Skoug等人[2]最早對溶出方法的開(kāi)發(fā)、驗證與標準制定進(jìn)行了綜述。Li等人[3]基于BCS分類(lèi)提出了化合物生物藥劑學(xué)特性的重要性，并提出了溶出方法開(kāi)發(fā)的決策樹(shù)。Gray等人[4]進(jìn)行了歷史性的展望，描述了溶出方法開(kāi)發(fā)和應用方面所面臨的挑戰。

　　以上資源為溶出方法開(kāi)發(fā)提供了一個(gè)堅實(shí)的基礎。本文提出了速釋固體口服制劑質(zhì)量控制溶出方法開(kāi)發(fā)的策略，提出了具體的指導和建議，文中所引用的相關(guān)文獻可作為一些溶出條件和開(kāi)發(fā)考慮的基礎。

　　材料與方法

　　材料

　　本案例中的化合物為一個(gè)弱堿鹽，是采用濕法工藝制備的速釋固體口服片劑。溶出的緩沖液由分析級試劑配制。

　　方法

　　溶出試驗在Distek2100C溶出儀上進(jìn)行，采用槳法，多種介質(zhì)，分析采用LEAP科技的OPT_DISSUV光纖系統，采用10mm探針，在320nm波長(cháng)處進(jìn)行檢測。

　　溶出試驗開(kāi)發(fā)指南

　　溶出方法的開(kāi)發(fā)過(guò)程如下所示，為便于識別，溶出試驗的每個(gè)重要參數都被分成單獨的段落進(jìn)行說(shuō)明。這份開(kāi)發(fā)指南的建立是基于監管部門(mén)的建議或指導原則，包括了監管機構所認可的溶出方法的各個(gè)方面。

　　基于BCS的溶解度

　　在溶出方法開(kāi)發(fā)中，最重要的是pH-溶解度數據。溶解度的結果可表明該化合物是否是基于BCS的高溶解性化合物。

　　如果該化合物的最大規格能在250ml的各個(gè)介質(zhì)（EMA指導原則[5]為pH1-6.8或FDA指導原則[6]為pH1-7.5）中溶解，那么就被認為是一種高溶解性化合物。

　　如果該化合物是高溶解性的，應采用900ml的0.1NHCl、pH4.5和pH6.8介質(zhì)、USP裝置2（槳法）、50rpm進(jìn)行溶出曲線(xiàn)測定。在標準轉速下溶出速率最慢的介質(zhì)可以被選作溶出方法。較慢的溶出速率將能夠增加區分處方組成、生產(chǎn)工藝變化或藥動(dòng)學(xué)性能的可能性。適當的溶出介質(zhì)可以確保該方法適合測定一個(gè)BCS3類(lèi)或BCS1類(lèi)的高溶解性化合物在整個(gè)貨架期間內是否符合標準規定。

　　如果該化合物在上述pH范圍內溶解度低，那么最初目標是開(kāi)發(fā)一個(gè)在30~60min至少達到85%溶出量的溶出方法[7]。如果采用不同粒度的API、不同劑型或其他關(guān)鍵屬性進(jìn)行了動(dòng)物PK研究，并發(fā)現了PK的差異，那么該方法理應能夠對這些處方進(jìn)行等級劃分。本文后續部分對如何為低溶解性化合物開(kāi)發(fā)一個(gè)適當的溶出方法提供了指導。

　　裝置

　　對于速釋固體口服制劑制劑，通常采用USP裝置1（籃法）或裝置2（槳法），其他USP裝置通常用于控釋或非口服制劑。

　　除非特殊情況，如果預期的商業(yè)劑型是非漂浮劑型，那么應該選擇槳法。

　　對于崩解型處方，籃法潛在的問(wèn)題是其轉籃下方的流體動(dòng)力學(xué)環(huán)境不像槳法那樣能夠充分混合，這將會(huì )導致溶出數據的分析更加具有挑戰性。

　　有時(shí)在藥物的早期研究階段使用的劑型可能與最終商業(yè)劑型不同，如果早期的劑型（如膠囊）漂浮，那么應考慮使用沉降裝置，以便于以后使用槳法。這將為膠囊轉化為片劑后，在方法中去掉沉降裝置的溶出數據提供一種最簡(jiǎn)單的數據追蹤方式。

　　在所有階段，這都是一個(gè)很好的能減少溶出方法變更的策略。對于一個(gè)漂浮劑型，應評估籃法和帶沉降裝置的槳法。有時(shí)，籃法在非崩解劑型上有一定優(yōu)勢，籃法能夠提供相同的流體動(dòng)力學(xué)環(huán)境同時(shí)也能夠保證介質(zhì)充分接觸到該制劑。

　　轉速

　　根據FDA[7]、EMA[5]和日本醫藥食品安全局（PFSB）[8]規定，槳法，50rpm應作為溶出方法開(kāi)發(fā)的起點(diǎn)。

　　如有圓錐形堆積（不溶解性輔料堆積在槳下，限制介質(zhì)進(jìn)入內部），應考察75rpm。FDA和PFSB推薦75rpm作為選項。增加槳的轉速可使輔料分散的更好，模擬體內分散，使溶出不受阻礙。如果要使用100rpm槳法，應有充分的理由，例如可以避免使用表面活性劑或減少表面活性劑的使用濃度。

　　采用籃法時(shí)，應首先考察100rpm的轉速[5,7,8]。FDA[7]也增加了籃法50rpm選項，如果溶出太快不能提供一條有區分力的曲線(xiàn)，可以考慮50rpm籃法。

　　只有當指導原則推薦的轉速參數不適用的情況下，才可考慮使用其它轉速，使用其它轉速應有充分證據。選擇一個(gè)不同的介質(zhì)（例如，對這個(gè)化合物具有較高溶解度的）來(lái)加快溶出比增加轉速更好。

　　在溶出方法開(kāi)發(fā)中一個(gè)好的診斷工具是在溶出試驗結束后增加“無(wú)限轉速”，以使顆粒被強制分散同時(shí)使未溶解的API的溶解。

　　例如，可在最后一次正常取樣點(diǎn)后，將轉速增加至150~250rpm維持15~30min，再進(jìn)行取樣。

　　這種做法可以快速檢查制劑的含量，并確保溶出不是受到溶解度的限制或者低的溶出量不是由含量低引起的。然而對于批放行檢驗，轉速的增加值是受到限制的。

　　溶出介質(zhì)和緩沖液

　　在處方開(kāi)發(fā)過(guò)程中，使用生物相關(guān)介質(zhì)進(jìn)行溶出試驗對內部決策具有重要作用，而常規的QC試驗則可以采用一種完全不同的方法[9]。生物相關(guān)介質(zhì)用于模擬復雜的人體胃腸道溶液，常常用于方法開(kāi)發(fā)過(guò)程中，以對一個(gè)化合物體內的溶解性和穩定性進(jìn)行更多的了解，同時(shí)也用于處方篩選。

　　JohannWolfgangGoethe大學(xué)的JenniferDressan研究了人體胃腸道溶液的復雜性，發(fā)表了大量關(guān)于生物相關(guān)介質(zhì)及其評價(jià)的文章[10-15]。

　　需要注意的是，采用生物相關(guān)介質(zhì)的溶出方法并不具備生物可預測性（與化合物臨床行為相關(guān)），除非在臨床研究數據中已經(jīng)建立了這種關(guān)系。如果QC試驗采用生物相關(guān)介質(zhì)，那么將會(huì )導致成本高、資源需求大和復雜性（發(fā)生錯誤的可能性）等問(wèn)題。采用生物相關(guān)介質(zhì)會(huì )增加耐用的質(zhì)量控制溶出方法開(kāi)發(fā)的難度。

　　因此，簡(jiǎn)單的緩沖鹽體系對于常規溶出分析而言更受歡迎，根據化合物自身特性所建立的方法可能具備生物可預測性。

　　溶出介質(zhì)種類(lèi)和體積需要滿(mǎn)足漏槽條件。

　　USP將漏槽條件定義為：一種藥物，其溶出介質(zhì)體積至少是能形成其飽和溶液體積的3倍。pH-溶解度曲線(xiàn)對于初步篩選溶出介質(zhì)提供了最有效的信息。Skoug等人[2]提出，體內體外相關(guān)性可能在接近飽和溶解度時(shí)達到。

　　然而，當溶出方法接近這個(gè)溶解度限度時(shí)，該試驗過(guò)度敏感的風(fēng)險也隨之上升，同時(shí)方法的耐用性也隨之下降。開(kāi)始時(shí)采用相對較慢的溶出速率（仍然要求在60min不低于85%的溶出量）篩選溶出方法不但可以提供足夠的區分力，而且可以降低后期開(kāi)發(fā)階段必須采用更加靈敏的試驗來(lái)評價(jià)處方或者工藝變更的風(fēng)險。

　　溶出介質(zhì)的pH范圍一般為1.1~6.8。由于溶解度原因，需要更高pH的溶出介質(zhì)時(shí)也可以接受，但通常不得超過(guò)8.0[7]。

　　pH選擇

　　溶出介質(zhì)基于所需的pH來(lái)選擇：

　　溶液pH為1.0~3.0選擇鹽酸

　　pH2.0~3.0選擇甘氨酸

　　pH2.5~3.5選擇檸檬酸鹽

　　pH4.0~5.5選擇醋酸鹽

　　pH6.0~8.0選擇磷酸鹽。

　　一個(gè)典型的緩沖鹽溶出介質(zhì)應具備0.05摩爾濃度。純水由于其來(lái)源不同，pH會(huì )不同，一般不作為溶出介質(zhì)。

　　如果在上述pH范圍的介質(zhì)不能提供足夠的溶出量，那么應該評估是否使用表面活性劑。十二烷基硫酸鈉（SDS）也叫做十二烷基磺酸鈉（SLS），是首選的表面活性劑[7]。SDS是介質(zhì)配制最常用的表面活性劑，是因為其純度高，不同廠(chǎng)家間質(zhì)量基本一致，而且很容易準確配制至所需的濃度。SDS在低于pH2的條件下會(huì )降解，但仍然可成功地在這些介質(zhì)中發(fā)揮作用[16]。

　　由于上述原因，SDS需要有一定穩定性或具備一定的使用期限。SDS純度應大于98%，目前可接受的SDS等級和其它監管中使用到的表面活性劑可以在FDA溶出網(wǎng)站上查到[16]。

　　溶出試驗中使用的表面活性劑濃度應進(jìn)行合理說(shuō)明，一般選擇能達到溶出曲線(xiàn)接受標準的最低濃度。0.1%~3%或者更高的SDS濃度是可以接受的[16]。0.23%SDS水溶液像一個(gè)潤濕劑，而不是一個(gè)溶解溶劑，因為該濃度低于其臨界膠束濃度。如果在如前所述的可接受的SDS濃度下，仍然無(wú)法在60min溶出85%以上，或者與活性成分或輔料發(fā)生反應，那么應該選用FDA網(wǎng)站[16]上的其他表面活性劑。

　　溶出介質(zhì)的脫氣效果應該進(jìn)行研究。室溫下的溶出介質(zhì)會(huì )比37℃時(shí)溶解更多的氣體。當對溶出介質(zhì)進(jìn)行加熱時(shí)，這些溶解的氣體會(huì )形成氣泡，可能會(huì )對溶出產(chǎn)生不可預測的影響。氣泡可能導致制劑粘附在溶出杯上，能夠減少介質(zhì)與顆粒接觸，或者增加顆粒漂浮的傾向。這些都會(huì )導致溶出速率發(fā)生顯著(zhù)變化。

　　溶出介質(zhì)體積

　　制藥工業(yè)和監管部門(mén)可接受的標準溶出介質(zhì)體積一般為500ml和900ml。選擇這個(gè)體積是為了使化合物達到漏槽條件，而不是代表藥品在體內所接觸的液體體積。McConnell和Mudie發(fā)表過(guò)關(guān)于人體胃腸道生理特性的詳細綜述[17,18]。

　　在開(kāi)發(fā)階段可以使用較少的溶出介質(zhì)體積以減小對API的需求。如果有漏槽-溶解度方面的原因，那么可以用更大的體積，如4L。無(wú)論哪種情況，一個(gè)合適的裝置都是必須的。制劑自身的溶出特性（如變異性和溶出曲線(xiàn)）是選擇介質(zhì)體積的最佳指導。盡量在以上這兩種標準介質(zhì)體積中選擇，這樣有利于方法轉移也有利于減少監管方面出現問(wèn)題。

　　一個(gè)藥品的所有規格最好使用同一種方法和相同的介質(zhì)體積，這樣可以對各個(gè)規格的溶出曲線(xiàn)進(jìn)行評估，也能對相同或相似處方進(jìn)行溶出評價(jià)。這種方法可以揭示高規格和低規格是否在體外溶出相似。此外，不同規格使用相同的溶出方法，可以為在特定情況下只研究高規格和低規格提供便利。

　　取樣時(shí)間點(diǎn)

　　在速釋制劑溶出方法開(kāi)發(fā)時(shí)，取樣時(shí)間點(diǎn)一般從5min到60min以上。5min點(diǎn)可用于混懸劑或其它快速溶出劑型，此時(shí)變異不高。典型的取樣時(shí)間為15、30、45、60min。

　　然而，取樣時(shí)間點(diǎn)取決于產(chǎn)品特性和方法追蹤處方核心屬性的能力。如果希望更好的研究或追蹤崩解效應，5min或10min時(shí)間點(diǎn)都是需要的。對于快速溶出產(chǎn)品，光纖溶出系統可以通過(guò)更多的取樣時(shí)間點(diǎn)得到更好的溶出曲線(xiàn)。如果在減慢溶出液穩定性方面有顯著(zhù)的風(fēng)險，那么應在60min后增加一個(gè)取樣時(shí)間點(diǎn)以保證至少獲得85%的平均溶出量。

　　15min

　　一般來(lái)講，15min點(diǎn)是很有用的，特別是化合物在這段時(shí)間內已經(jīng)溶出至少85%。

　　如果是在0.1NHCl中滿(mǎn)足這種情況，FDA[7]認為這個(gè)制劑的行為與溶液一樣，通常不應該有任何生物利用度方面的問(wèn)題。15min這個(gè)時(shí)間點(diǎn)也是BCS3類(lèi)藥物可能BE豁免的一個(gè)指定的時(shí)間點(diǎn)[5]。

　　最后，對于在15min內溶出至少85%[6]或大于85%[5]的溶出曲線(xiàn)，相似性評價(jià)時(shí)不需要采用f2因子法。

　　沉降裝置（Sinkers）

　　如前所述，在USP裝置2（槳法）測定膠囊時(shí)可以使用沉降裝置。此外，對于有粘性的片劑和崩解緩慢的片劑也可以使用沉降裝置。

　　當片劑粘在溶出杯的非中心位置上時(shí)，溶出曲線(xiàn)可能會(huì )產(chǎn)生高變異結果。不在中心的片劑與位于中心的片劑相比處于一個(gè)不同的流體動(dòng)力學(xué)環(huán)境中[19,20]。

　　緩慢崩解的片劑需要周?chē)后w流動(dòng)來(lái)產(chǎn)生更加一致的溶出曲線(xiàn)。使用槳法進(jìn)行測定時(shí)，將這種片劑裝在沉降裝置里可以解決這些問(wèn)題。應該研究各種沉降裝置類(lèi)型確定哪種適合，在方法中應該規定使用的沉降裝置的類(lèi)型，因為不同類(lèi)型的沉降裝置在制劑周?chē)哂胁煌牧黧w動(dòng)力學(xué)環(huán)境。

　　過(guò)濾和終點(diǎn)分析

　　對溶出樣品進(jìn)行過(guò)濾不但可以減少取樣后API顆粒的溶出，還可以降低輔料顆粒堵塞分析設備的風(fēng)險。典型的濾膜孔徑是0.45~70μm。對于微粉化藥物而言，分析者應盡可能使用最小孔徑的濾膜。

　　溶出分析方法取決于藥物的劑型、藥物量、藥物的UV吸收情況。采用光纖分析或在線(xiàn)UV對溶出樣品進(jìn)行檢測是有效的技術(shù)手段，在溶出試驗結束時(shí)就能提供結果，加快了速度。UV方法是否適用，取決于合適的吸光度和沒(méi)有明顯膠囊殼或輔料干擾。HPLC/UPLC是另一種典型的分析方法，在HPLC分析中，對低規格藥物最好增加進(jìn)樣體積而不是通過(guò)減少溶出介質(zhì)來(lái)增加檢測靈敏度。

　　耐用性

　　溶出參數（如pH、表面活性劑濃度等）變化對溶出曲線(xiàn)的影響應該在方法的開(kāi)發(fā)階段進(jìn)行評估。

　　例如，在溶出耐用性考察中，pH值的微小變化影響應該進(jìn)行評估，&plusmn;0.05的偏差不應該對溶出速率產(chǎn)生顯著(zhù)影響。如果有顯著(zhù)影響，那么應該根據耐用性結果選擇其他合適的pH值。

　　方法靈敏度/區分力的評價(jià)

　　通常采用變更目標商業(yè)規模處方或工藝參數所制備的批次來(lái)評價(jià)溶出方法的靈敏度或區分力。需要考慮的因素包括：藥物粒徑、處方組成（如低量崩解劑）、工藝變化（如過(guò)度制粒）。這些變化因素可以采用擬定溶出方法進(jìn)行評價(jià)，應該證明在體外具有足夠的區分力。然而，什么才是足夠敏感是因項目而異的。

　　后續開(kāi)發(fā)

　　表1匯總了在溶出方法早期開(kāi)發(fā)階段的一些關(guān)鍵建議。溶出方法開(kāi)發(fā)應基于對關(guān)鍵處方/工藝參數變化的靈敏度以及不同處方的臨床PK研究結果進(jìn)行持續優(yōu)化。在開(kāi)發(fā)階段，處方調整或其他處方可能在臨床中進(jìn)行測試。

　　在研究體內體外相關(guān)性（IVIVC）的溶出方法優(yōu)化中，經(jīng)常需要臨床PK結果。要通過(guò)調整溶出結果使其更好的重現體內結果來(lái)優(yōu)化溶出試驗。

　　需要注意的是，當在研究中采用兩個(gè)相似處方時(shí)，不應期望溶出試驗一定能夠模擬體內趨勢。這是因為每一個(gè)處方的關(guān)鍵處方變量可能不同，使用一個(gè)通用的IVIVC來(lái)用于這兩個(gè)處方評價(jià)可能不能實(shí)現。如果一個(gè)特定處方的調整在臨床研究中進(jìn)行了測試，這些結果可以用來(lái)指導調整溶出方法來(lái)建立體內體外相關(guān)性（IVIVC）。IVIVC的開(kāi)發(fā)策略、IVIVC獲批后如何測定、以及批選擇的過(guò)程在最近的一篇文章中進(jìn)行了詳細描述[21]。

　　案例研究

　　下面列舉了一個(gè)經(jīng)濕法制粒的速釋固體口服片劑的溶出方法開(kāi)發(fā)案例。

　　這個(gè)化合物是一個(gè)弱堿鹽，pH-溶解度曲線(xiàn)見(jiàn)圖1，這個(gè)化合物僅在酸性條件下溶解。對于一個(gè)標準的速釋固體口服制劑來(lái)講，API的粒度對處方是一個(gè)關(guān)鍵質(zhì)量屬性。通過(guò)兩個(gè)不同粒徑的API的片劑的研究，進(jìn)行了介質(zhì)的選擇，見(jiàn)圖2。

　　在不同pH的介質(zhì)中，采用50rpm、900ml進(jìn)行了研究。結果表明，pH3.0是一個(gè)符合漏槽條件、對API粒徑具有區分力的溶出介質(zhì)。

　　第二個(gè)需要研究的關(guān)鍵質(zhì)量屬性是這個(gè)化合物的物理狀態(tài)。這個(gè)化合物是鹽的形式，遇濕會(huì )可能會(huì )轉化成游離堿形式。通過(guò)不同比例游離堿鹽制備的兩個(gè)批次片劑對不同pH介質(zhì)的區分力進(jìn)行了研究，見(jiàn)圖3。

　　pH3.0是最具區分力的介質(zhì)，同時(shí)也滿(mǎn)足在60min至少溶出85%的開(kāi)發(fā)標準。pH3.5介質(zhì)在這個(gè)時(shí)間內溶出沒(méi)有達到至少85%。pH3.0介質(zhì)溶出譜能夠區分出很寬比例的游離堿鹽的片劑，見(jiàn)圖4。

　　隨著(zhù)比例的增加，溶出速率下降。采用50rpm，900ml，pH3.0介質(zhì)這個(gè)溶出條件對不同批次的考察結果表明，對處方中這兩個(gè)主要關(guān)鍵屬性是具有靈敏度或區分力的。

　　結論

　　本文對質(zhì)量控制溶出方法的開(kāi)發(fā)提出了一項策略和具體建議。溶出方法的開(kāi)發(fā)基于化合物及其處方的特性。這項開(kāi)發(fā)策略是基于世界各地健康監管部門(mén)的法規。

　　一個(gè)速釋固體口服制劑的溶出方法開(kāi)發(fā)案例表明，對關(guān)鍵質(zhì)量屬性應具有一定的區分力。一個(gè)溶出方法的優(yōu)化應基于其對關(guān)鍵處方/工藝變化的敏感性，如有可能，應盡可能反映出真實(shí)的體內響應。