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內(nèi)外結(jié)合胰島功能體外評估方法詳解

2018-11-12 來源:菲糖新動  標(biāo)簽: 掌上醫(yī)生 喝茶減肥 一天瘦一斤 安全減肥 cps聯(lián)盟 美容護膚
摘要:實驗前各組大鼠自由攝食飲水,戊巴比妥鈉(50mg/kg,ip)麻醉下取出胰臟。雙重結(jié)扎腸系膜動脈并剪斷、分離,取出十二指腸以下的全部腸管以充分暴露。

繼上個專題為大家介紹了β細胞功能的評估指標(biāo)與方法,這期專題我們主要集中在β細胞治療新技術(shù)方面。目前,在動物模型中對胰島β細胞功能的評估并不僅限于活體內(nèi),除葡萄糖耐量試驗等體內(nèi)評估技術(shù)外,胰島表面灌注及離體胰腺灌注技術(shù)等體外評估技術(shù)也逐步應(yīng)用,今天我們就將為大家詳細介紹胰島功能的體外評估方法。

胰腺灌流

1966年,大鼠胰腺灌流方法由Sussman等學(xué)者首次建立,并先后由Assan、Giroix等進行了改進和完善,此后廣泛應(yīng)用于大鼠胰島β細胞胰島素分泌動力學(xué)研究。下面是具體的操作流程:

胰腺分離:

實驗前各組大鼠自由攝食飲水,戊巴比妥鈉(50mg/kg,ip)麻醉下取出胰臟。雙重結(jié)扎腸系膜動脈并剪斷、分離,取出十二指腸以下的全部腸管以充分暴露。需盡可能高的結(jié)扎食管,并在結(jié)扎線上端剪開;另一未打結(jié)的結(jié)扎線環(huán)繞胃環(huán)肝系膜,在腹中線端點上、膈肌根部小心暴露主動脈,然后系緊胃肝系膜上的結(jié)扎線,并于結(jié)扎上方剪斷系膜。在雙重鉗夾之間及下面鉗子的下方剪斷主動脈,從腹腔取出胰臟。放開對著腹中線起端主動脈切口上的夾子,露出主動脈口,插入動脈插管,在適當(dāng)?shù)奈恢迷o,使開口靠近結(jié)扎線,并靠近門脈末端。

灌流:

開始灌流,觀察液體從門靜脈口流出。1~2min后,停止灌流,進行門靜脈插管,以備收集灌流液。隨后恢復(fù)灌流,保持灌流壓力約為100mmHg。灌流溫度為37.5℃,灌流速度1.75mL/min。分別收集每分鐘的灌流液,共收集30min,-20℃保存,待查胰島素含量.

胰島灌流

目前在國內(nèi)基礎(chǔ)研究中,針對動物模型所采用的胰島β細胞功能評估方法大多為分離胰島后,給予高糖/低糖刺激,并取其上清液測定胰島素濃度。這種方法反映了給予葡萄糖負(fù)荷后一定時間內(nèi),分泌的胰島素總量,但不能同時反映胰島素在分泌時相和分泌數(shù)量方面的變化,且無法探究節(jié)律。而胰島灌流可以從分泌時相和分泌數(shù)量兩個方面評價胰島素分泌功能,更準(zhǔn)確的評估胰島功能。

離體胰島灌流系統(tǒng)

灌流準(zhǔn)備:

胰島分離后置于Hanks平衡液中,于二氧化碳孵箱38℃下孵育1h,并將胰島按每組50個進行分組。將離體胰島灌流系統(tǒng)置于37℃下水浴,并將微最泵輸注系統(tǒng)與其連接。隨后將預(yù)先配置好的低糖灌流液充填至整個管道系統(tǒng),在層析柱中加入葡聚糖凝膠,然后將每組50個胰島轉(zhuǎn)移至層析柱,再加入100ul葡聚糖凝膠。最后將整個管道系統(tǒng)全部浸入水浴。

灌流:

開始時用低糖灌流液以0.5ml/h的速度灌流1h,隨后換為高糖灌流液以1ml/h的速度灌流,并以開始高糖灌流時為0時間點,分別于灌流前30、20、10min、灌流后0、20、40、60、80、100s和2、3、4、5、7、8、9、10、15、20、25、30min收集灌流出的液體,-80℃下保存,隨后測定胰島素含量,并根據(jù)胰島素濃度繪制胰島素第一時相分泌曲線。

這些體外評估方法由于排除了體內(nèi)多種因素的干擾,能夠較準(zhǔn)確地評估胰島β細胞功能,是研究動物模型不同病理生理狀態(tài)下胰島β細胞胰島素分泌能力變化及機制、以及各種營養(yǎng)物質(zhì)和藥物對胰島β細胞功能影響及其作用機制的重要手段。

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