尿液的成分與結(jié)石的形成密切相關(guān)，當(dāng)尿液的成分發(fā)生變化時，在尿液中就可能有結(jié)石的形成。尿液成分的變化，主要與體內(nèi)代謝的變化有關(guān)。結(jié)石的形成從化學(xué)動力看大致分為成核、生長、聚焦、固相轉(zhuǎn)化等過程。在此過程中有多種促進成石物質(zhì)與抑制成石物質(zhì)的參與。

促進成石物質(zhì)包括：鈣離子、草酸、磷酸、尿酸、蛋白質(zhì)等因素；抑制成石物質(zhì)包括：枸櫞酸、鎂離子、焦磷酸鹽、大分子物質(zhì)葡糖胺聚糖、RNA分子片段等。Curhan等指出尿液中的尿量、鈣、鎂、草酸、枸櫞酸、鈉、鉀、磷和尿酸等與結(jié)石形成最密切，它們的濃度會影響結(jié)石的發(fā)生。

尿石癥的患病率及復(fù)發(fā)率高，通過24h尿成石危險因素評估患者的代謝狀況，結(jié)合藥物及飲食指導(dǎo)能有效降低尿石癥的復(fù)發(fā)率。然而對24h尿液不同的保存及檢測方法會對尿成石危險因素的分析結(jié)果產(chǎn)生一定影響，從而導(dǎo)致檢測結(jié)果不能真實地反映人體的代謝水平。成石危險因素測定所需24h尿液的長時間保存一直都是一個難題。這是因為24h尿液中各成石危險因素在不同情況下的溶解度不同，不同保存方法都會對結(jié)果產(chǎn)生影響。另外，24h尿標(biāo)本收集周期較長，尿中成石危險因素真實水平易受其它因素影響。

不同研究者對24h尿標(biāo)本的保存方法的報道不盡相同。不同的保存方法對尿液保存的原理雖然不盡相同，但都可用于尿液保存，因而也缺乏統(tǒng)一。與其他的24小時尿液檢測項目不同，由于24h尿成石危險因素分析指標(biāo)較多，特別是枸櫞酸、草酸等易受尿液中其他成分包括細菌等微生物影響。因此，有的保存方法對24h尿成石危險因素分析準確的結(jié)果及客觀地評價人體的代謝水平尤為重要。

目前24h尿成石危險因素分析標(biāo)本有效保存劑仍存在一定爭議。歐洲泌尿外科協(xié)會2017版尿結(jié)石指南建議尿結(jié)石的代謝評估需要連續(xù)兩次的24h尿液的評估,尿液樣本應(yīng)用5％的麝香草酚異丙醇液防腐，儲存于<8°C的溫度中。尿液pH值的評估，應(yīng)收集新鮮尿，每天評估四次。在特殊情況下，鹽酸也可以用作防腐劑，以防止草酸鈣和磷酸鈣的沉淀。鹽酸保存的尿標(biāo)本，不能來測pH。如果需要測定尿液中的尿酸，還需要對尿液標(biāo)本進行尿液的堿化。

一、24h尿液標(biāo)本的收集

由于24h尿成石危險因素水平易受多種因素影響，每天排泄的水平不穩(wěn)定，因此實踐中要考慮收集標(biāo)本的次數(shù)以準確反映人體代謝狀況，同時也要考慮患者的依從性。邏輯上講，收集24小時尿液次數(shù)愈多，結(jié)果越能反映人體代謝水平。Grampsas等研究發(fā)現(xiàn)92%的初發(fā)結(jié)石患者愿意收集24小時尿液進行代謝評估，99%復(fù)發(fā)結(jié)石患者愿意收集24小時尿液進行代謝評估，Chandhok等研究認為99%復(fù)發(fā)性結(jié)石患者愿意行長期結(jié)石預(yù)防。我國泌尿系結(jié)石治療指南中也指出，需要連續(xù)收集患者正常飲食下2次24h尿液。歐洲泌尿外科指南也推薦，條件許可的情況下應(yīng)收集兩次24小時尿定量分析以保證結(jié)果更準確。但在臨床實踐中，收集多次24小時尿會增加患者費用和降低患者對該項目的信任度，因此常收集單次24小時尿用于分析成石危險因素，但其準確性仍存在爭議。Ronald等認為，單獨收集一份24小時尿液后先酸化、后堿化就能有效保存尿液中成石危險因素，這樣可以增加患者依從性。

邏輯上講，收集尿液次數(shù)愈多，結(jié)果越可靠，但為了減輕患者經(jīng)濟上和時間上的負擔(dān)，在我國指南中指出，需要連續(xù)收集患者正常飲食下2次24小時尿液，但也有學(xué)者認為，兩次24小時尿定量分析，隔周1次，其中一份于收集前以30ml，6mol/L的濃鹽酸為保存劑，檢查除尿酸外的所以的成石危險因素，另一份以30ml，0.3mmol/L疊氮化鈉堿化化尿液用以保存和檢查尿液中尿酸，但過程比較繁瑣。Ronald等認為，單獨收集一份24小時尿液后先酸化、后堿化就能有效保存尿液中成石危險因素，這樣可以增加患者依從性。Renato等研究發(fā)現(xiàn)，24小時尿液收集前和收集后行酸化/堿化等處理都能正確反映尿液中成石危險因素水平，兩者之間并無差異。國外學(xué)者指出收集24小時尿液可能會遺漏尿液的收集或過多的收集尿液。采用檢測尿液中肌酐，男性一般為20-25mg/kg/d，女性為15-20mg/kg/d，通過標(biāo)準化尿液后可以只收集一次尿液就能有效檢測尿液中各成分。劉曉等研究發(fā)現(xiàn)，通過晨尿或上午隨意尿液的鈣/肌酐，磷/肌酐能較好的反應(yīng)24小時尿磷和尿鈣值。

二、24h尿液標(biāo)本保存方法

（一）尿液標(biāo)本保存麝香草酚法

麝香草酚是一種能抑菌和殺菌的固體有機物，能殺滅尿液中細菌，減少尿液成分分解。因此有學(xué)者提出用麝香草酚保存尿液，并發(fā)現(xiàn)24h后取少量用于檢測尿肌酐，取部分尿液用濃鹽酸酸化至PH1.5-2.5，取少量加熱至56℃10分鐘，檢測尿鈣、尿磷、尿鎂、尿草酸及尿枸櫞酸，剩余的尿液加入濃氫氧化鈉堿化至PH為9.0-10.0，取少量尿液加熱至56℃10分鐘后，用于檢測尿尿酸。結(jié)果證明，麝香草酚能有效保存24h尿中各種成石危險因素。但操作過于復(fù)雜。Pak等也發(fā)現(xiàn)用麝香草酚保存后的尿液也能有效反映尿液中的成石危險因素的值。Albrecht等認為用5%的麝草酚溶液就可以有效保存尿液中各成石危險因素。酸化保存尿液可以降低尿液PH值，抑制尿液中維生素C向草酸轉(zhuǎn)化，但是由于尿液pH降低，會導(dǎo)致尿酸的溶解度減少。

麝香草酚是固體，無特殊氣味，毒性較小，便于攜帶，是保存24小時尿液較好的方法。尿液麝香草酚的保存，常按100ml尿液中加入0.1g麝香草酚，<8°C低溫保存。收集瓶內(nèi)應(yīng)備用5％麝香草酚異丙醇（2L的瓶10毫升）并存放在涼爽的溫度下（<8°C或更低）。尿液pH值應(yīng)該收集新鮮尿每天四次，當(dāng)難以進行24h尿收集時，例如在幼童，可應(yīng)用新鮮尿液樣本替代24h尿液取樣的方法。但對新鮮尿的研究，可能會因不同性別，體重和年齡的差異，造成結(jié)果的差異。

（二）尿液標(biāo)本保存酸堿化交替保存法

在09年歐洲泌尿外科指南曾推薦使用酸化、堿化交替的保存方法收集24小時尿液：①.連續(xù)收集兩次24小時尿液時，第1次以30ml,6mol/L的濃鹽酸作為保存劑，檢測除尿酸外的其他成分；第2次以0.3mmol/L的疊氮化鈉為保存劑，檢測尿酸。②.收集1次24小時尿標(biāo)本時，6點-22點時段以6mol/L的濃鹽酸為保存劑收集用于除尿酸外的其他各種成分的分析；22點至次日6點的尿液以0.3mmol/L的疊氮化鈉作為保存劑，用于尿酸的分析。Laerum等指出，向收集尿液的容器中預(yù)先加入濃鹽酸后再收集尿液，可以抑制鈣、鎂和草酸鹽沉淀，同時能防止尿液中草酸前體轉(zhuǎn)變?yōu)椴菟帷?/p>

RenatoRibeiro等研究發(fā)現(xiàn)，無論是在收集前還是收集后對尿液行酸堿化處理，都能準確反映尿液中成石危險因素水平，兩者之間無差異。但在尿液中加入酸保存，降低了尿液PH值，可導(dǎo)致尿酸溶解度減低，引起尿酸沉淀。需要收集前或收集后在尿液中加入堿以中和鹽酸。一般按每100ml尿液加入1ml濃鹽酸，但由于濃鹽酸具有腐蝕性，貯存不方便，且會改變尿液PH值。因此，鹽酸保存并不能完美的保存尿液中所有的成石危險因素。堿化尿液能增加尿液中到溶解度，國內(nèi)外推薦使用疊氮化鈉對尿液進行保存，能準確檢查尿液中尿酸。RenatoRibeiro等研究發(fā)現(xiàn)加入碳酸氫鈉來堿化尿液也能有效保存尿液中尿酸，因此推薦堿化尿液來保存尿液中尿酸。

（三）尿液標(biāo)本保存甲苯法

甲苯不溶于尿液，可用于24h尿的保存。其檢測的值也可以準確反映成石危險因素水平。甲苯是一種有機防腐劑，能在尿液表面形成薄膜，防止尿液細菌污染，減少尿液中有機成分的分解。一般與尿液比例按1：100預(yù)先加入到收集容器中。甲苯pH值為中性，不會對尿液引起酸堿化，對機器和設(shè)備腐蝕作用較小，國內(nèi)既往一般用甲苯作為24h成石危險因素分析標(biāo)本的保存劑，然而，甲苯本身具有一定的毒性和強揮發(fā)性，對人體有一定的副作用，長期接觸可引起慢性中毒。

（四）尿液標(biāo)本低溫保存法

尿液標(biāo)本低溫保存是指將尿標(biāo)本置于4℃冰箱恒溫保存。Nicar等研究發(fā)現(xiàn)，4℃低溫能有效保存尿液中各成石危險因素，即使保存5天，尿液中成分也能穩(wěn)定不變，但是這樣檢測有諸多不便之處，所需設(shè)備要求也較高。Ronald等研究發(fā)現(xiàn)，將暫時不檢測的尿液置于低溫，可以減少尿中有機成分特別是枸櫞酸的分解。但低溫保存會引起晶體析出，同時對設(shè)備要求高，依從性差，不適合24小時尿標(biāo)本的保存。

（五）尿液標(biāo)本常態(tài)保存法

Yilmaz等研究發(fā)現(xiàn)，對24小時尿液不行酸化處理檢測尿鈣、尿鎂、尿磷及不行堿化處理檢測尿尿酸結(jié)果同酸化或堿化處理后的結(jié)果無差別，同時也發(fā)現(xiàn)檢測前是否通過加熱來提高溶解度對檢查結(jié)果無影響。但尿液標(biāo)本常態(tài)保存法并不能為大多數(shù)研究者所認同。

（六）尿液標(biāo)本甲醛法

甲醛是一種有機防腐劑，能凝固尿液中蛋白質(zhì)，故可抑制細菌生長并固定尿液中有形成分，一般按0.5：100的比例加入尿液中。常用于保存尿液中細胞的管型，而較少用于保存24小時尿液成石危險因素分析標(biāo)本的保存。

總之，尿液成分復(fù)雜，且收集24h尿過程較長，每種方法檢測方法不盡相同，有多種因素可影響尿液中成石危險因素各成分濃度。因此，只有先擇合適的保存方法和檢測手段才能得到準確的結(jié)果。目前各成分特別是陰離子檢測方法相對獨立，手工操作較多，影結(jié)果準確性的因素較多，期望24小時尿成石危險因素分析能全自動化以得到更準確結(jié)果，以利于結(jié)石治療和預(yù)防。