弓形蟲(chóng)病別名:弓形體病
弓形蟲(chóng)病 的檢查:
㈠病原檢查
1.直接鏡檢: 取患者血液、骨髓或腦脊液、胸腹水、痰液、支氣管肺泡灌洗液、眼房水、羊水等作涂片,或淋巴結、肌肉、肝、胎盤(pán)等活組織切片,作瑞氏或姬氏染色鏡檢可找到滋養體或包囊,但陽(yáng)性率不高。亦可作直接免疫熒光法檢查組織內弓形蟲(chóng)。
2.動(dòng)物接種或組織培養: 取待檢體液或組織懸液,接種小白鼠腹腔內,可產(chǎn)生感染并找到病原體,第一代接種陰性時(shí),應盲目傳代3次。或作組織(猴腎或豬腎細胞)培養以分離、鑒定弓形蟲(chóng)。
3.DNA雜交技術(shù): 國內學(xué)者首次應用32P標記含弓形蟲(chóng)特異DNA序列的探針,與患者外周血內細胞或組織DNA進(jìn)行分子雜交,顯示特異性雜交條帶或斑點(diǎn)為陽(yáng)性反應。特異性和敏感性均高。此外,國內亦已建立多聚酶鏈反應診斷本病,并與探針雜交、動(dòng)物接種和免疫學(xué)檢查方法相比較,顯示春具高度特異、敏感和快速等優(yōu)點(diǎn)。
㈡免疫學(xué)檢查
1.檢測抗體: 所用抗原主要有速殖子可溶性抗原(胞質(zhì)抗原)和胞膜抗原。前者的抗體出現較早(用染色試驗、間接免疫熒光試驗檢測)、而后者的抗體出現較晚(用間接血凝試驗等檢測)。同時(shí)采用多種方法檢測可起互補作用而提高檢出率。由于弓形蟲(chóng)在人體細胞內可長(cháng)期存在,故檢測抗體一般難以區別現癥感染或以往感染,可根據抗體滴度的高低以及其動(dòng)力學(xué)變化加以判斷。常用的檢測方法有:
⑴染色試驗(Sabin-Feldman DT):檢測IgG抗體。感染后1~2周出現陽(yáng)性,3~5周抗體效價(jià)達高峰,以后逐漸下降,可維持多年。抗體效價(jià)1∶陽(yáng)性提示為隱性感染;1∶256為活動(dòng)性感染1∶1024為急性感染。其缺點(diǎn)為需要活蟲(chóng)進(jìn)行操作。
⑵間接熒光抗體試驗(IFAT):檢測IgM和IgG抗體。具靈敏、特異、快速、重復性好等優(yōu)點(diǎn),與DT基本一致。但如有類(lèi)風(fēng)濕因子、抗核抗體陽(yáng)性時(shí),可引起假陽(yáng)性反應。血清抗體效價(jià)1∶64為既往感染,余同DT。
⑶間接血凝試驗(IHA):試驗方法簡(jiǎn)便。與DT結果符合率高。但一般在病后一個(gè)月左右出現陽(yáng)性。結果判斷同IFAT。重復性差和致敏紅細胞不穩定與其缺點(diǎn)。
⑷酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA):可檢查IgM與IgG抗體。并有靈每度高、特異性強等優(yōu)點(diǎn)。也可用于抗原鑒定。近年來(lái)在ELISA的基礎上又創(chuàng )建、衍生了多種新新的測定方法,如金葡萄A蛋白(SPA)-ELISA;辣根過(guò)氧化物酶標記SPA取代酶標第二抗體進(jìn)行ELISA檢測(PPA-ELISA);親和素-生物素(ABG)ELISA;凝膠擴散(DIG)-ELISA;斑點(diǎn)(DDT)-ELISA以及單克隆抗體(McAb)-ELISA等更靈敏、更特異的方法。
⑸放射免疫試驗(RIA):具有高度敏感性和特異性。
2.檢測抗原: 系用免疫學(xué)方法檢測宿主細胞內的病原(速殖子或包囊)、在血清及體液中的代謝或裂解產(chǎn)物(循環(huán)抗原)。是早期診斷和確診的可靠方法。國內外學(xué)者建立了McAb-ELISA以及McAb與多抗的夾心型ELISA法檢測急性患者血清循環(huán)抗原,其敏感度為能檢出血清中0.4μg/ml的抗原。
㈢皮內試驗: 以受染小白鼠腹腔液或雞胚液作抗原。常出現延遲性、結核菌素反應。可用作流行病學(xué)調查。目前應用不多。
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