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β-內酰胺酶

β-內酰胺酶概述

 β-內酰胺酶是指能催化水解生物分子中β-內酰胺環(huán)中的的酰胺鍵的滅活酶。細菌產生β-內酰胺酶是細菌對β-內酰胺類抗生素耐藥的主要機制。β-內酰胺酶類抗生素包括青霉素類,頭孢菌素類,非典型β-內酰胺類等,是品種最多,研究進展最快,臨床應用最廣泛的一大類藥物。

β-內酰胺酶正常值

  • 體內菌群的種類和比例正常,人體處于動態(tài)平衡。 

β-內酰胺酶臨床意義

  • 細菌耐藥性的機制:
    1、滅活酶――主要為β內酰胺酶(200多種),使抗生素失效。
    2、靶位改變――與抗生素結合靶位的改變,使抗生素作用下降。
    3、細菌膜通透性的改變――使抗生素不能或很少進入細菌體內到達作用靶位。
    細菌耐藥性的發(fā)展從醫(yī)院內菌株(如腸桿菌科、金黃色葡萄球菌)到醫(yī)院外菌株(如肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌、淋球菌),其耐藥性從對單種藥物耐藥發(fā)展至多重耐藥,例如金黃色葡萄球菌對青霉素耐藥;ESBL菌株對多種常用抗生素耐藥。
    異常結果腸桿菌科、金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌、淋球菌等感染,但是用抗生素無效或者效果不明顯,細菌產生耐藥性。
    需要檢查的人群有上述情況的患者。 

β-內酰胺酶檢查方法

  • β-內酰胺酶的檢測
    臨床標本中分離金黃色葡萄球菌、流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌以及最近發(fā)現(xiàn)的腸球菌屬少數(shù)菌株對青霉素、氨芐青霉素出現(xiàn)耐藥。由于上述菌株產生 β-內酰胺酶水解前述抗生素。檢測該酶有下列方法:
    (一)微生物活性消失法
    此法是以一株對青霉素高度敏感的枯草芽胞桿菌的指示菌,如待檢菌株產生β內酰胺酶,破壞了青霉素,則在劃線兩邊有枯草芽胞菌生長,否則指示菌仍呈很大抑菌環(huán)。
    (二)淀粉-碘測定法
    β內酰胺酶破壞β內酰胺環(huán),碘與被打開β內酰胺環(huán)結合,使藍色的淀粉-碘復合物轉變成無色。
    方法:用pH6.0磷酸緩沖液配制青霉素懸液 6000μg/ml,取該液0.1 ml置于微量稀釋板凹孔中,挑選檢測菌株數(shù)個菌落混懸于其中,搖動30min,靜置室溫中1h,加淀粉液2滴,再加碘液1滴,混合,立即觀察顏色變化,陽性者當加入碘液后,首先立即出現(xiàn)藍色、如在10min內消失藍色,提示該菌產生β-內酰胺酶。
    (三)酸測量法
    青霉素被β-內酶胺酶水解后成青霉素酸,pH值下降6.8以下,用酚紅指示劑,由紅(紫)色 (原液:枸櫞酸緩沖液pH8.5) → 黃色(pH6.8以下)。
    (四)頭孢硝基噻吩顯色反應
    頭孢硝基噻吩(Nitrocefin)的β-內酰胺環(huán)被β-內酰胺酶打開,基質由黃色變成紅色。
    液體方法:10mg頭孢硝基噻吩溶解于lml的二甲基亞砜中,然后用0.1mol/L PBS(pH7.0)再稀釋 1:20,最后濃度為500μg/m1,溶液呈黃或淡橙色,保存4~10℃,可用幾個星期。取該溶液0.05ml置放于微量稀釋板凹孔中或小試管中,挑取被試菌落,制成濃厚懸液,與凹孔中基質液混和,室溫10~ 30min,頭孢硝基噻吩由黃變成紅色為陽性,若顯色不明顯,觀察可延長6h。
    有報道紙片法用于流感嗜血桿菌和淋病奈瑟菌檢測β-內酰胺酶的結果是準確的,但對于某些菌株產生少量而與菌細胞緊密結合的β-內酰胺酶,如腐生葡萄球菌等,用液體法檢測更好。上述任何一種檢測方法都應用質量控制。 

β-內酰胺酶注意事項

  • 1、檢查前禁忌:注意正常的生活飲食習慣,注意個人衛(wèi)生。
    2、檢查時要求:積極配合醫(yī)生。
    不合宜人群: 沒有。 

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