熱鹽水試驗概述

熱鹽水試驗是利用熱鹽水對血細胞進行檢查，用于檢查細胞核溶解情況。

• 檢查部位 其他
• 科室 內(nèi)科體檢、保健科
• 相關(guān)疾病 貧血
• 相關(guān)癥狀 靜脈出血 動脈出血 反復(fù)出血 白血病細胞浸潤 口渴

熱鹽水試驗正常值

• 細胞核不溶解、細胞形態(tài)清晰為陰性。

熱鹽水試驗臨床意義

• 異常結(jié)果：檢查結(jié)果為陽性。在粒細胞系統(tǒng)中，中幼粒細胞以下各階段細胞的大部分，細胞核被溶解而且程度明顯(++-+++)。原始粒細胞的細胞核較少被溶解或不溶解，程度也輕(+-++)。早幼粒細胞細胞核溶解情況介于二者之間。淋巴與單核細胞一般不溶解，偶見輕度溶解(+)。以溶解(+)以上的幼稚細胞>10%為診斷界限。急性粒細胞診斷符合率達78.5%，而急性單核或淋巴細胞均不符合。有助于急性白血病細胞類型的鑒別。但幼稚細胞溶解(+)以下，<10%，不能完全排除急性粒細胞白血病?！?br /> 需要檢查的人群：有貧血、出血、感染、發(fā)熱明顯特征的人群。

熱鹽水試驗檢查方法

• 1. 樣本處理：
  a. 組織勻漿：稱取100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等，PBS或生理鹽水沖洗，洗凈血水，濾紙吸干，用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入1.0 mL預(yù)冷的Lysis Buffer，再加入50ul Reagent A ， 0℃冰浴中上下研磨組織20次;有未研磨開的組織，可用雙層紗布過濾。
  b. 培養(yǎng)細胞勻漿：消化細胞，PBS洗滌，800*g 5~10 min離心收集細胞。計數(shù)。每次提取需要5*107個細胞，加入1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸細胞，再加入50ul Reagent A，將細胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi)，0℃冰浴研磨細胞20~30次。
  2. 將組織或細胞勻漿物轉(zhuǎn)移到1.5ml離心管中，4℃，700*g 離心5 min。細胞核沉淀在收集管底部，棄上清。加入0.5 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸沉淀;
  3. 取另一新離心管內(nèi)加入0.5 mL Medium Buffer，吸取上一步的重懸液，沿管壁小心地加入到此離心管中，置于Medium Buffer之上，4℃， 700*g 離心5min。將上清轉(zhuǎn)移到新離心管，細胞核沉淀在管底;
  4. 棄上清，在細胞核沉淀中加入0.5 mL Lysis Buffer重懸細胞核沉，1000*g 離心10min ，棄上清，得較純的細胞核沉淀;
  5. 用50-100μL Store Buffer 或合適的反應(yīng)緩沖液重懸細胞核沉淀，立即使用或-70℃保存。

熱鹽水試驗注意事項

• 不合宜人群：無。
  檢查前禁忌：檢查前一天不吃過于油膩、高蛋白食物，避免大量飲酒。血液中的酒精成分會直接影響檢驗結(jié)果。體檢前一天的晚八時以后，應(yīng)禁食。
  檢查時要求：
  1. 為保證獲得完整的細胞核，第一是全程低溫操作。第二是快速。第三，在不破壞亞細胞器的情況下破碎細胞是制備細胞核的最關(guān)鍵環(huán)節(jié)。與組織塊相比，培養(yǎng)細胞特別是貼壁培養(yǎng)細胞在用玻璃勻漿器勻漿時較難破壁，因而要選用小容量玻璃勻漿器、間隙嚴密的研杵上下研磨培養(yǎng)細胞。
  2. 以離心力g計算正確的離心速度，不同的離心機可據(jù)此精確計算離心速度。
  3. 進行Western Blot和2D-膠電泳，可直接加入上樣緩沖液裂解細胞核。