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T4/T8比值

T4/T8比值概述

CD4+/CD8+細(xì)胞在免疫應(yīng)答過程中起著十分重要的調(diào)節(jié)作用。臨床上檢測患者外周血中T淋巴細(xì)胞亞群或TH/TS比值,有助于了解機(jī)體的免疫狀態(tài)和某些疾病的發(fā)病機(jī)制和輔助診斷。 

T4/T8比值正常值

  • 2~3∶1。 

T4/T8比值臨床意義

  • (1)降低腫瘤、病毒感染、真菌感染、免疫缺陷癥。
    (2)升高自身免疫性和變態(tài)反應(yīng)性疾病。 

T4/T8比值檢查方法

  • (1)直接免疫熒光法:
    ①取肝素抗凝外周血,用淋巴細(xì)胞分層液獲得單個核細(xì)胞,Hank液配成(1~2)×106細(xì)胞/ml。
    ②取1ml細(xì)胞懸液加入5ml塑料管中,離心2000r/min,2min,棄上清。
    ③加FITC-CD4、FITC-CD8各20μl,對照管加mIgG-FITC,4℃反應(yīng)30min。
    ④Hank液洗2次,2000r/min,2min。
    ⑤流式細(xì)胞計分析。
    (2)間接免疫熒光法:
    ①分離PBMC,調(diào)至(1~2)×106細(xì)胞/ml。
    ②取1ml細(xì)胞懸液于5ml塑料管中,離心2000r/min,2min,棄上清。
    ③加抗CD4、CD8單克隆抗體各100μl,對照管加抗體稀釋液或正常小鼠IgG,4℃反應(yīng)30min。
    ④Hank液洗2次,離心2000r/min,2min,棄上清。
    ⑤各加50μl FITC-IgG,4℃反應(yīng)30min。
    ⑥Hank液洗2次,2000r/min,2min。
    ⑦滴片,熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞計分析。 

T4/T8比值注意事項

  • 同B細(xì)胞檢測。另外,由于間接免疫熒光技術(shù)所用的羊或兔抗鼠熒光抗體與部分白細(xì)胞表面發(fā)生非特異結(jié)合,以及Fc受體的非特異細(xì)胞反應(yīng)和多克隆熒光抗體的結(jié)合放大效應(yīng),從而造成非特異陽性熒光細(xì)胞增多。而對FITC直標(biāo)單克隆抗體來說,抗體成分、性質(zhì)和結(jié)構(gòu)上完全均一,只要不使蛋白質(zhì)-FITC復(fù)合物上帶上過多的電荷,就不會產(chǎn)生非特異吸附。目前國外基本上是用直接免疫熒光法,流式細(xì)胞計來分析T細(xì)胞亞群的,由于該儀器價格昂貴,國內(nèi)尚未普及應(yīng)用。因而對一般臨床實驗室來說,用免疫熒光顯微鏡也能開展這項工作。 

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