T4/T8比值概述
CD4+/CD8+細胞在免疫應答過(guò)程中起著(zhù)十分重要的調節作用。臨床上檢測患者外周血中T淋巴細胞亞群或TH/TS比值,有助于了解機體的免疫狀態(tài)和某些疾病的發(fā)病機制和輔助診斷。
T4/T8比值正常值
2~3∶1。
T4/T8比值臨床意義
(1)降低腫瘤、病毒感染、真菌感染、免疫缺陷癥。
(2)升高自身免疫性和變態(tài)反應性疾病。
T4/T8比值檢查方法
(1)直接免疫熒光法:
①取肝素抗凝外周血,用淋巴細胞分層液獲得單個(gè)核細胞,Hank液配成(1~2)×106細胞/ml。
②取1ml細胞懸液加入5ml塑料管中,離心2000r/min,2min,棄上清。
③加FITC-CD4、FITC-CD8各20μl,對照管加mIgG-FITC,4℃反應30min。
④Hank液洗2次,2000r/min,2min。
⑤流式細胞計分析。
(2)間接免疫熒光法:
①分離PBMC,調至(1~2)×106細胞/ml。
②取1ml細胞懸液于5ml塑料管中,離心2000r/min,2min,棄上清。
③加抗CD4、CD8單克隆抗體各100μl,對照管加抗體稀釋液或正常小鼠IgG,4℃反應30min。
④Hank液洗2次,離心2000r/min,2min,棄上清。
⑤各加50μl FITC-IgG,4℃反應30min。
⑥Hank液洗2次,2000r/min,2min。
⑦滴片,熒光顯微鏡觀(guān)察或流式細胞計分析。
T4/T8比值注意事項
同B細胞檢測。另外,由于間接免疫熒光技術(shù)所用的羊或兔抗鼠熒光抗體與部分白細胞表面發(fā)生非特異結合,以及Fc受體的非特異細胞反應和多克隆熒光抗體的結合放大效應,從而造成非特異陽(yáng)性熒光細胞增多。而對FITC直標單克隆抗體來(lái)說(shuō),抗體成分、性質(zhì)和結構上完全均一,只要不使蛋白質(zhì)-FITC復合物上帶上過(guò)多的電荷,就不會(huì )產(chǎn)生非特異吸附。目前國外基本上是用直接免疫熒光法,流式細胞計來(lái)分析T細胞亞群的,由于該儀器價(jià)格昂貴,國內尚未普及應用。因而對一般臨床實(shí)驗室來(lái)說(shuō),用免疫熒光顯微鏡也能開(kāi)展這項工作。